Suiwer Saposhnikovia divaricata olie vir kers en seep maak groothandel diffuser essensiële olie nuut vir riet brander diffusers
kort beskrywing:
2.1. Voorbereiding van SDE
Die risome van SD is as 'n gedroogde kruie van Hanherb Co. (Guri, Korea) gekoop. Die plantmateriaal is taksonomies bevestig deur Dr Go-Ya Choi van die Korea Institute of Oriental Medicine (KIOM). 'n Koopbewysmonster (nommer 2014 SDE-6) is in die Koreaanse Herbarium van Standaard Kruiehulpbronne gedeponeer. Gedroogde risome van SD (320 g) is twee keer met 70% etanol (met 'n 2 uur reflux) onttrek en die ekstrak is dan onder verlaagde druk gekonsentreer. Die afkooksel is gefiltreer, gevriesdroog en by 4°C gestoor. Die opbrengs van gedroogde ekstrak uit ru-aanvangsmateriale was 48.13% (gew./gew.).
Chromatografiese analise is uitgevoer met 'n HPLC-stelsel (Waters Co., Milford, MA, VSA) en 'n fotodiode-skikkingdetektor. Vir die HPLC-analise van SDE, die prim-O-Glucosylcimifugin-standaard is gekoop by die Korea Promotion Institute for Traditional Medicine Industry (Gyeongsan, Korea), ensek-O-glukosielhamaudol en 4′-O-β-D-glukosiel-5-O-methylvisamminol is binne ons laboratorium geïsoleer en geïdentifiseer deur spektrale ontledings, hoofsaaklik deur KMR en MS.
SDE-monsters (0.1 mg) is in 70% etanol (10 ml) opgelos. Chromatografiese skeiding is uitgevoer met 'n XSelect HSS T3 C18 kolom (4,6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, VSA). Die mobiele fase het bestaan uit asetonitril (A) en 0.1% asynsuur in water (B) teen 'n vloeitempo van 1.0 mL/min. ’n Meerstap-gradiëntprogram is soos volg gebruik: 5% A (0 min), 5–20% A (0–10 min), 20% A (10–23 min) en 20–65% A (23–40 min. ). Die opsporingsgolflengte is by 210–400 nm geskandeer en by 254 nm aangeteken. Die inspuitvolume was 10,0μL. Standaardoplossings vir die bepaling van drie chromone is voorberei teen 'n finale konsentrasie van 7.781 mg/ml (prim-O-glukosielsimifugien), 31,125 mg/ml (4′-O-β-D-glukosiel-5-O-metielvisaminol), en 31,125 mg/ml (sek-O-glucosylhamaudol) in metanol en by 4°C gehou.
2.3. Evaluering van anti-inflammatoriese aktiwiteitIn vitro
2.3.1. Selkultuur en monsterbehandeling
RAW 264.7 selle is verkry vanaf die American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, VSA) en gegroei in DMEM medium wat 1% antibiotika en 5.5% FBS bevat. Selle is in 'n bevochtigde atmosfeer van 5% CO2 by 37°C geïnkubeer. Om die selle te stimuleer, is die medium vervang met vars DMEM-medium, en lipopolisakkaried (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, VSA) by 1μg/ml is bygevoeg in die teenwoordigheid of afwesigheid van SDE (200 of 400μg/ml) vir 'n bykomende 24 uur.
2.3.2. Bepaling van stikstofoksied (NO), prostaglandien E2 (PGE2), tumornekrosefaktor-α(TNF-α), en Interleukin-6 (IL-6) Produksie
Selle is behandel met SDE en gestimuleer met LPS vir 24 uur. GEEN-produksie is ontleed deur nitriet te meet met die Griess-reagens volgens 'n vorige studie [12]. Afskeiding van die inflammatoriese sitokiene PGE2, TNF-α, en IL-6 is bepaal met behulp van 'n ELISA-stel (R&D-stelsels) volgens vervaardiger se instruksies. Die effekte van SDE op NO en sitokienproduksie is bepaal by 540 nm of 450 nm met behulp van 'n Wallac EnVision™mikroplaatleser (PerkinElmer).
2.4. Evaluering van Antiosteoartritis-aktiwiteitIn Vivo
2.4.1. Diere
Manlike Sprague-Dawley-rotte (7 weke oud) is by Samtako Inc. (Osan, Korea) gekoop en onder gekontroleerde toestande gehuisves met 'n 12-uur lig/donker siklus by°C en% humiditeit. Rotte is van 'n laboratoriumdieet en water voorsienad libitum. Alle eksperimentele prosedures is uitgevoer in ooreenstemming met die National Institutes of Health (NIH) riglyne en goedgekeur deur die Dieresorg- en Gebruikskomitee van die Daejeon-universiteit (Daejeon, Republiek van Korea).
2.4.2. Induksie van OA met MIA in rotte
Die diere is gerandomiseer en aan behandelingsgroepe toegewys voor die aanvang van die studie (per groep). MIA-oplossing (3 mg/50μL van 0,9% soutoplossing) is direk ingespuit in die intra-artikulêre spasie van die regterknie onder narkose geïnduseer met 'n mengsel van ketamien en xylasien. Rotte is ewekansig in vier groepe verdeel: (1) die soutgroep met geen MIA-inspuiting, (2) die MIA-groep met MIA-inspuiting, (3) die SDE-behandelde groep (200 mg/kg) met MIA-inspuiting, en (4) ) die indometasien- (IM-) behandelde groep (2 mg/kg) met MIA inspuiting. Rotte is oraal toegedien met SDE en IM 1 week voor MIA inspuiting vir 4 weke. Die dosis SDE en IM wat in hierdie studie gebruik is, was gebaseer op dié wat in vorige studies gebruik is [10,13,14].
2.4.3. Mates van agterpoot gewigdraende verspreiding
Na OA-induksie is die oorspronklike balans in gewigdraende vermoë van agterpote versteur. 'n Onvermoë-toetser (Linton-instrumentasie, Norfolk, VK) is gebruik om veranderinge in die gewigdraende toleransie te evalueer. Rotte is versigtig in die meetkamer geplaas. Die gewigdraende krag wat deur die agterste ledemaat uitgeoefen word, is gemiddeld oor 'n tydperk van 3 s. Die gewigverspreidingsverhouding is deur die volgende vergelyking bereken: [gewig op regter agterste ledemaat/(gewig op regter agterste ledemaat + gewig op linker agterste ledemaat)] × 100 [15].
2.4.4. Metings van serum sitokienvlakke
Die bloedmonsters is gesentrifugeer by 1 500 g vir 10 min by 4°C; dan is die serum versamel en by -70°C gestoor tot gebruik. Die vlakke van IL-1β, IL-6, TNF-α, en PGE2 in die serum is gemeet deur gebruik te maak van ELISA-stelle van R&D Systems (Minneapolis, MN, VSA) volgens vervaardiger se instruksies.
2.4.5. Real-Time Kwantitatiewe RT-PCR Analise
Totale RNA is uit kniegewrigweefsel onttrek met behulp van die TRI reagens® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, VSA), omgekeerd getranskribeer in cDNA en PCR-amplifiseer met 'n TM One Step RT PCR kit met SYBR groen (Applied Biosystems) , Grand Island, NY, VSA). Intydse kwantitatiewe PCR is uitgevoer met behulp van die Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR-stelsel (Applied Biosystems, Grand Island, NY, VSA). Die primervolgordes en die probe-volgorde word in Tabel getoon1. Porties van monster-cDNA's en 'n gelyke hoeveelheid GAPDH-cDNA is geamplifiseer met die TaqMan® Universal PCR-meestermengsel wat DNA-polimerase bevat volgens vervaardiger se instruksies (Applied Biosystems, Foster, CA, VSA). PKR toestande was 2 min by 50°C, 10 min by 94°C, 15 s by 95°C, en 1 min by 60°C vir 40 siklusse. Die konsentrasie van teikengeen is bepaal deur gebruik te maak van die vergelykende Ct (drempelsiklusgetal by kruispunt tussen amplifikasie plot en drempel) metode, volgens vervaardiger se instruksies.
Osteoartritis (OA) is die mees algemene muskuloskeletale afwyking en die mees algemene degeneratiewe gewrigsiekte by bejaardes [1]. OA is 'n toestand wat deels veroorsaak word deur besering, verlies aan kraakbeenstruktuur en -funksie, en wanregulering van pro-inflammatoriese en anti-inflammatoriese weë [2,3]. Dit affekteer hoofsaaklik die artikulêre kraakbeen en subchondrale been van sinoviale gewrigte en lei tot gewrigsversaking, wat lei tot pyn wanneer gewig dra, insluitend loop en staan.4].
Daar is geen genesing vir OA nie, aangesien dit baie moeilik is om die kraakbeen te herstel sodra dit vernietig is [5]. Die doelwitte van behandeling is om pyn te verlig, gewrigsmobiliteit te handhaaf of te verbeter, die sterkte van die gewrigte te verhoog en die invaliderende effekte van die siekte te verminder. Farmakologiese behandelings van OA het ten doel om pyn te verminder om sodoende die pasiënt se gewrigsfunksie en lewenskwaliteit te verhoog. Alhoewel kraakbeenvernietiging die hoofgebeurtenis in OA is, is die afbraak van kollageen die fundamentele insident wat die onomkeerbare progressie van OA in verband met inflammasie bepaal [6,7]. Behandelings met anti-inflammatoriese en chondroprotektiewe aktiwiteit sal na verwagting pyn verlig en matriksintegriteit in OA-pasiënte handhaaf.
Daarom sal vermindering van inflammasie waarskynlik voordelig wees in OA-bestuur. Onlangse studies dui op beskermende rolle vir kruiehulpbronne oor die vordering van OA, in terme van die versagting van chondrosiet-ontsteking en verdere kraakbeenvernietiging, deur hul vermoë om met gewrigsverwante weefsels te reageer, wat lei tot die versagting van gewrigspyn [8].
Die wortel vanSaposhnikovia divaricataSchischkin (Umbelliferae) is wyd gebruik in tradisionele medisyne vir die behandeling van hoofpyn, pyn, inflammasie en artritis in Korea en China [9,10]. Die diverse farmakologiese effekte vanSaposhnikovia divaricata(SD) sluit ook anti-inflammatoriese, pynstillende, antipiretiese en antiartritiese eienskappe in [9,11]. 'n Onlangse studie het getoon dat SD-chromoon-uittreksel potensiële antirumatoïede artritis-effekte het in 'n muismodel van kollageen-geïnduseerde artritis [10]; min studies is egter uitgevoer om die anti-inflammatoriese en antiartritis-aktiwiteit van te ondersteunSaposhnikovia divaricatauittreksel (SDE).
Daarom het die huidige studie die anti-inflammatoriese en anti-osteoartritis aktiwiteite van 'n 70% etanol uittreksel van SD ondersoek. Eerstens is die anti-inflammatoriese effek van SDE geëvalueerin vitroin LPS-geïnduseerde RAW 264.7-selle. Vervolgens is die anti-osteoartritis-effek van SDE gemeet deur gewigdraende verspreiding, degradasie van artikulêre kraakbeen en inflammatoriese response in 'n rotmodel van mononatriumjodoasetaat- (MIA-) geïnduseerde OA te bepaal.